2014.04.30 MRS培養基

配置MRS培養基

MRS(尚未加入Agar)

• 粉末配方：MRS, Agar

• 目標體積：2800 mL ( 700mL*4瓶)

器材：

1. 定量筒*1 >> 1000mL/個
2. 一般大量桶*1
3. 磁性攪拌棒*5，釣魚線*1 >> 非真的釣魚線...
4. 玻棒*1
5. 廣口血清瓶*4 >> 1000mL/個
6. 電子秤*1
7. 鋁箔
8. 量匙*2
9. 小燒杯*5 >> 250mL
10. 塑膠漏斗*1
11. 滅菌膠帶

方法：

1. MRS：瓶身標示55g → 1L，但這次目標是要700mL*4瓶，所以其換算公式 >> 55g → 1L = Xg → 0.7mL，X= 38.5g/瓶，最後總重154g。>> 器具：電子秤、鋁箔、量匙、小燒杯*1。
2. Agar：15g → 1L ( 1.5% ) = Xg → 0.7mL，X=10.5g/瓶，最後總重42g。>>>但因Agar不溶於水，所以要額外分裝再個別添加至MRS裡。>> 器具：電子秤、鋁箔、量匙、小燒杯*4。
3. 過程中的水，一律使用純水。"清水洗過的器皿需用純水沖過"。
4. 將4個廣口血清瓶各置入1個磁性攪拌棒，以便滅菌過後將其攪拌均勻。
5. 將秤量好的MRS粉末倒入量桶裡，磁性攪拌棒用75%酒精滅菌過後也跟丟進去。 >> 大量筒*1、磁性攪拌棒*1。
6. 先用定量筒秤500mL的純水，首先慢慢倒入200mL的純水與MRS粉末混合，在此之前可先啟動讓磁性攪拌棒開始攪拌。 >> 定量筒、玻棒。
7. 看MRS與純水混合均勻後，接著到入500mL、1000mL、800mL的純水，若攪伴不勻，可使用玻棒幫忙(要用75%酒精滅菌)。
8. MRS溶液攪拌均勻後，用定量筒秤量700mL再倒入廣口血清瓶，此動作重複4次，共4瓶血清瓶。 >> 連泡泡都要一起倒入。
9. 分裝成4瓶700mL的MRS溶液後，再各別倒入10.5g的Agar粉末。 >> 塑膠漏斗。
10. 接著將蓋子旋緊，再開半圈，以防突沸。
11. 最後在瓶口與瓶身部分貼上一段滅菌膠帶。
12. 置入滅菌釜，滅菌。

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裝好的MRS+Agar

700mL的MRS溶液

置入滅菌釜準備滅菌